細胞培養(yǎng)實驗室組建的基本要求:
1、細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術,要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2、細胞培養(yǎng)室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新,干燥和無煙塵。
3、細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是無菌操作區(qū)設在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側,常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設在潔凈室外,避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境。細胞潔凈室需要一個空調(diào)系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。
4、解剖實驗室主要用于對器官組織的分離,需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡、各種手術器材等。
智能臺式高速冷凍實驗室離心機 3H24RI
組織細胞培養(yǎng)室除一般實驗室的普通常規(guī)設備外,尚有一些特殊需要的設備?;究煞譃閮纱箢悾?/span>
第一類為常用的基本設備;
第二類為較高級的特殊設備。
1. 細胞培養(yǎng)實驗室常用的基本儀器設備
1.顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設備之一,便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。
2.培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細胞和體內(nèi)細胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,適溫度是37℃,溫差變化一般不應超過±0.5℃,細胞在溫度升高2℃ 時,持續(xù)數(shù)小時即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
3.干燥箱:用于細胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。
4.水純化裝置:細胞培養(yǎng)對水的質量要求較高,細胞培養(yǎng)以及與細胞培養(yǎng)工作相關的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。進行細胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,也應使用二次以上蒸餾水。
5.冰箱:細胞培養(yǎng)室必須配備。
a、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養(yǎng)液、生li鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標本。
b、低溫冰箱(-20℃)——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑,如酶、血清等。
6.細胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟)三種因素。
7.離心機:進行細胞培養(yǎng)時,常規(guī)需要進行制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作,通常需要使用實驗室離心機。一般可常規(guī)配置4000rpm的國產(chǎn)臺式離心機,例如細胞沉降,使用低速離心機即可,離心力過大有時可能引起細胞的損傷。
臺式低速離心機TD5A
8.天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器:一般為高壓蒸汽滅菌鍋,直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
10.濾器:目前細胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質,這些物質在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細菌。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器,各種濾器有其使用原理和特點。
常用的培養(yǎng)器皿:
培養(yǎng)用器皿是供細胞接種、生長等用的器皿,可由透明度好、無毒的中性硬質玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成。細胞培養(yǎng)中需要的各種耗材,各類細胞培養(yǎng)板,細胞培養(yǎng)瓶,平皿移液管等。
培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細胞。進行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)。國產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進口培養(yǎng)瓶則多以底面積(cm2)表示。
培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板:為塑料制品??晒┘毎寺〖凹毎拘缘雀鞣N檢測實驗使用。其優(yōu)點是節(jié)約樣本及試劑,可同時測試大量樣本,易于進行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,常用的規(guī)格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
培養(yǎng)操作有關的器皿
貯液瓶:常見的為藍蓋瓶,主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格,如1000ml、500ml、250ml、 100ml、50ml、5ml等。
吸管:主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細胞。
加樣器(移液器):分為微量移液器和電動移液器。用于吸取、移動液體或滴加樣本??筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小,吸量準確、方便??杀WC實驗樣品(或試劑)含量精確,重復性良好。
其他用品:尚有收集細胞用的離心管,放置試劑或臨時插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺使用的酒精燈,供實驗人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。
器械
主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時持取物件。常用的有:手術刀或解剖刀、手術剪或解剖剪(彎剪及直剪),用于解剖動物、分離及切剪組織,制備原代培養(yǎng)的材料;眼科虹膜小剪(彎剪或直剪),用于將組織材料剪成小塊;血管鉗及組織鑷、眼科鑷(彎、直),用于持取無菌物品(如小蓋玻片)夾持組織等;口腔科探針或代用品,用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。
2、細胞培養(yǎng)實驗室特殊設備
細胞培養(yǎng)實驗室除了應配備上述的常用基本設備以外,如有條件,可添置一些特殊或先進的設備儀器,以便更有效、更精確、更深入地進行實驗室工作。例如:
(1)酶聯(lián)免疫檢測儀——可用于進行免疫學測定及細胞毒性、藥物敏感性檢測等。
(2) 超低溫冰箱(-80℃)——便于儲存某些試劑及標本。
(3)旋轉培養(yǎng)器——用于某些特殊細胞或需要收獲大量細胞的培養(yǎng)。
(4) 熒光顯微鏡——進行熒光染色樣本的觀察。
(5) 流式細胞儀——可更精確及快速檢測細胞。
(6)用于檢測細胞培養(yǎng)條件的各種儀器,例如專門為快速分析細胞培養(yǎng)基中主要或關鍵營養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設計的多功能細胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測定儀等。
其余儀器
對于細胞實驗還可能需要振蕩器及磁力攪拌器用于混勻液體;還有一些沾滿細胞的難清洗的不銹鋼類或玻璃類器皿,則需要超聲波清洗機的幫助;如果涉及免疫實驗,肯定需要冰浴,碎冰的需求量大的話,則需要購買制冰機;另外破碎細胞可能會需要超聲波細胞破碎儀;